Методика исследования

Бензилпенициллина натриевая соль

Benzylpenicillinum Natricum

C₁₆H₁₇N₂NaО₄S

Бензилпенициллина натриевая соль является солью бензилпенициллиновой кислоты, продуцируемой Pénicillium notatum или другими родственными организмами, или получаемой другими методами и обладающей антимикробным действием.

Содержание C₁₆H₁₇N₂NaО₄S не менее 90% и содержание суммы пени- циллинов в препарате не менее 96%.

При определении активности биологическим методом общая активность препарата (сумма пенициллинов) не менее 96%. Теоретическая активность натриевой соли бензилпенициллина 1670 ЕД/мг. 0,0005988 мг химически чистой натриевой соли бензилпенициллина соответствует одной единице действия (ЕД).

Точность определения должна быть такова, чтобы доверительные пределы при Р=95% отклонялись от среднего значения не более чем на ±5% .

Средняя величина найденной активности должна быть не менее 1600 EД/мг.

Описание. Белый мелкокристаллический порошок горького вкуса, слегка гигроскопичен. Легко разрушается при действии кислот, щелочей и окислителей, при нагревании в водных растворах, а также при действии пенициллиназы. Медленно разрушается при хранении в раствора при комнатной температуре.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, растворим в этиловом и метиловом спиртах.

Подлинность. Несколько кристаллов препарата помещают на предметное стекло или в фарфоровую чашку, прибавляют 1 каплю раствора, состоящего из 1 мл 1Н раствора гидроксиламина гидрохлорида и 0,3 мл 1Н раствора едкого натра. Через 2—3 минуты к смеси прибавляют 1 каплю 1Н раствора уксусной кислоты, тщательно перемешивают, затем прибавляют 1 каплю раствора нитрата меди; выпадает осадок зеленого цвета.

1 мл раствора препарат подкисляют разведенной уксусной кислотой, если необходимо, фильтруют, затем прибавляют 0,5 мл раствора цинк-уранил-ацетата; образуется желтый кристаллический осадок.

Препарат, внесенный в бесцветное пламя, окрашивает его в желтый цвет (реакция на натрий).

Прозрачность и цветность раствора. 3% раствор препарата в воде для инъекций должен быть бесцветным и прозрачным в течение 24 часов при температуре не выше 10°.

Удельное вращение не менее +270° (2% раствор препарата в свеже- прокипяченной и охлажденной воде).

Показатель поглощения. Оптическая плотность 0,18% свежеприготовленного раствора препарата в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 280 нм не более 0,18. Разность между оптическими плотностями при длинах волн 263 нм и 280 нм не менее 0,72.

Кислотность или щелочность. рН 5,5—7,5 (2% водный раствор, потенциометрически).

Потеря в весе при высушивании. Около 2 г препарата (точная навеска) сушат при 100—105° до постоянного веса. Потеря в весе не должна превышать 1%.

Испытание на токсичность. Тест-доза 5000 ЕД в объеме 0,5 мл воды, внутривенно. Срок наблюдения 24 часа.

Испытание на пирогенность. Тест-доза 5000 ЕД в 1 мл воды на 1 кг, внутривенно. Препарат, предназначенный для наружного применения, не подвергается испытанию на пирогенность.

Испытание на стерильность. Препарат должен быть стерильным.

Количественное определение.

Сумма пенициллинов. Около 0,06 г препарата (точная навеска) растворяют в воде в мерной колбе емкостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 5 мл раствора переносят в коническую колбу с притертой пробкой емкостью 250 мл, прибавляют 2 мл 1Н раствора едкого натра и оставляют на 20 минут. После этого к смеси прибавляют 2 мл 1Н раствора соляной кислоты, 5 мл 0,3М раствора ацетатного буфера (рН 4,50±0,05), 20 мл 0,01Н раствора йода и оставляют на 20 минут в темном месте. Избыток йода титруют 0,01Н раствором тиосульфата натрия до слабо желтого цвета, затем прибавляют раствор крахмала и титруют до обесцвечивания.

В контрольную колбу переносят 5 мл раствора пенициллина, прибавляют 5 мл 0,3М раствора ацетатного буфера (рН 4,50±0,05), 20 мл 0,01Н раствора йода, оставляют на 20 минут в темном месте, после чего избыток йода титруют 0,01 н. раствором тиосульфата натрия, как описано выше.

Разность в объемах между титрованиями соответствует содержанию суммы пенициллинов в препарате.

Один мг стандартного препарата натриевой соли бензилпенициллина соответствует 1,045 мг суммы пенициллинов, в пересчете на бензилпенициллина калиевую соль.

Бензилпенициллин. Около 0,06—0,12 г препарата (точная навеска) вносят в центрифужную пробирку и растворяют в 2 мл воды.

К полученному раствору прибавляют 2 мл амилацетата (реактив №1) и 0,5 мл раствора фосфорной кислоты. Пробирку закрывают и энергично встряхивают в течение 15 секунд, после чего центрифугируют 20—25 секунд. Слой амилацетата отбирают пастеровской пипеткой как можно полнее и фильтруют в сосалку—пробирку, погруженную в ванну со льдом, через стеклянный фильтр №4, в который предварительно добавляют 0,1 г измельченного в порошок безводного сульфата натрия.

В предварительно взвешенную плоскодонную колбу емкостью 5 мл вносят 1 мл ацетона (реактив №2), 0,5 мл смеси N-этилпиперидина с амилацетатом (реактив №3) и 1 мл амилацетатного фильтрата. Содержимое колбы тщательно перемешивают колбу помещают в широкий бюкс, закрывают крышкой и оставляют стоять в холодильнике 2 часа.

Выпавший осадок N-этилпиперидиновой соли бензилненициллина переносят во взвешенный фильтр.

Колбочку с частично оставшимся осадком и осадок на фильтре промывают 1 мл ацетона, затем высушивают в вакуум-эксикаторе при комнатной температуре в течение 1—2 часов до постоянного веса. 1 г осадка соответствует 0,8322 г калиевой соли бензилпенициллина.

Термостабильность. При нагревании препарата в течение 17 часов при 170° допускается снижение содержания суммы пенициллинов не более чем на 10%.

Упаковка. Во флаконы, герметически закрытые резиновыми пробками, обжатыми алюминиевыми колпачками, по 125 000 ЕД, 250 000 ЕД, 500 000 ЕД и 1 000 000 ЕД. Каждый флакон должен содержать не менее 90% и не более 110% количества ЕД, указанных на этикетке.