Определение подлинности
Объективное заключение о подлинности цефалоспориновых антибиотиков позволяют сделать ИК-спектры в области 4000— 400 см-1. С их помощью можно установить наличие или отсутствие ацетоксигруппы в боковой цепи по С3 дигидротиазинового цикла и подтвердить отнесение испытуемого препарата к числу производных 7-АДЦК (цефалексин, цефалоридин, цефазолин, цефтриаксон) или 7-АЦК (цефалотин, цефапирин, цефатаксим, цефуроксим). Для всех цефалоспоринов общими являются полосы в области колебаний карбонильных групп (1800—1500 см-1) и карбоксильной группы (1620—1600 см-1). В другой области более высоких частот (3500—2500 см-1), обусловленной валентными колебаниями амино- и амидогрупп, ИК-спектры имеют существенные различия. Наиболее специфические спектральные кривые цефалоспориновых антибиотиков расположены в области «отпечатков пальцев» (1500—650 см-1). Перспективным для идентификации оказался метод спектроскопии ЯМР 1Н с использованием в качестве растворителя диметилсульфоксида. Выделены сигналы протонов бета-лактамных и дигидротиазиновых циклов, по которым проведено отнесение анализируемых соединений к цефалоспориновым антибиотикам. Кроме того, метод позволяет по характерным сигналам протонов ацильных остатков в боковой цепи бета-лактамного фрагмента и радикалов в положении 3 дигидротиазинового цикла провести надежную идентификацию каждого из цефалоспориновых антибиотиков.
Подлинность препаратов цефалоспоринов можно установить, действуя смесью 80%-ного раствора серной кислоты и 1%-ного раствора азотной кислоты. Цефалексин приобретает желтое окрашивание, а цефалотина натриевая соль — оливково-зеленое, переходящее в красно-коричневое. Открывают также ион натрия в натриевой соли цефалотина.
Наличие бета-лактамного цикла у препаратов цефалоспоринов, а у цефалотина еще и сложноэфирной группы, обусловливает протекание гидроксамовой реакции. Методика выполнения такая же, как и в случае анализа препаратов пенициллинов. Образуются окрашенные гидроксаматы меди (II) и железа (III).
Цефалексин характеризуется наличием в молекуле остатка алифатической аминокислоты, которую можно обнаружить с помощью нингидрина. Аминокислотный остаток дает возможность идентифицировать цефалексин по реакции комплексообразования с ионом меди (II) в среде уксусной кислоты. После добавления раствора гидроксида натрия в нейтральной среде появляется оливково-зеленое окрашивание.
Наличие специфических примесей в цефалотина натриевой соли (не более 5%) устанавливают методом ГЖХ по сумме площадей всех пиков на хроматограмме, кроме пика основного вещества. Этим же методом определяют содержание остаточных растворителей (эфира и н-пропилового спирта).