Количественное определение
Количественное определение натриевой, калиевой и новокаиновой солей бензилпенициллина выполняют гравиметрическим методом. Бензилпенициллин извлекают амилацетатом и количественно осаждают в виде N-этилпиперидиновой соли:
Осадок N-этилпиперидиновой соли бензилпенициллина промывают, высушивают до постоянной массы и взвешивают. Затем делают пересчет на соответствующую соль.
В новокаиновой соли бензилпенициллина определяют содержание новокаина, который извлекают хлороформом в виде основания, тщательно промывают водой, затем добавляют 0,01 М раствор серной кислоты, избыток которой оттитровывают 0,01 М раствором гидрокеида натрия. Содержание новокаина должно быть не менее 37,5 и не более 40,5% .
Сумму полусинтетических пенициллинов в натриевой соли оксациллина и динатриевой соли карбенициллина определяют методом обратной нейтрализации. В его основе лежит количественно происходящий при нагревании на водяной бане процесс гидролиза 0,1 М раствором гидрокеида натрия до образования производных пенициллоиновой кислоты:
Избыток гидроксида натрия оттитровывают 0,1 М раствором соляной кислоты (индикатор фенолфталеин).
Ампициллин количественно определяют методом формольного титрования, как препараты аминокислот. Навеску препарата растворяют в воде, добавляют разбавленный нейтрализованный раствор формальдегида и через 2 мин титруют раствором гидроксида натрия (индикатор фенолфталеин). Известен меркуриметрический метод определения ампициллина с использованием в качестве титранта нитрата ртути (II) или хлорида ртути (II), а также метод титрования в неводных растворителях.
Количественное определение карфециллина натриевой соли осуществляют методом кислотно-основного титрования в сочетании с воздействием на препарат фермента пенициллиназы. Контроль за значением рН (7,0±0,1) осуществляют потенциометрически. Титруют навеску препарата 0,1 М раствором гидроксида натрия при постоянном перемешивании с 1 мл раствора пенициллиназы до тех пор, пока указанное значение рН будет оставаться неизменным в течение 3 мин.
Активность препаратов пенициллинов устанавливают микробиологическим методом по антибактериальному действию на определенный штамм золотистого стафилококка. Одна единица действия соответствует активности 0,5988 мкг химически чистой натриевой соли бензилпенициллина (1670 ЕД в 1 мг). Микробиологический метод определения пенициллинов дает воспроизводимость результатов 5 —10% . Алкалиметрический метод определения суммы пенициллинов имеет удовлетворительную воспроизводимость, но дает завышенные результаты, так как одновременно титруются все примеси, взаимодействующие со щелочью.
Наиболее точные, сопоставимые с микробиологическим методом результаты дает спектрофотометрическое определение пенициллинов, основанное на его гидролизе в кислых буферных растворах до пеницилленовых кислот. Они имеют максимум све- топоглощения при 322,5 нм. Присутствие ионов меди (II) повышает чувствительность реакции и воспроизводимость результатов определения. Этот способ определения рекомендован для количественной оценки полусинтетических пенициллинов: ампициллина, оксациллина, карбенициллина, диклоксациллина и др. Общая схема гидролиза пенициллинов в кислой среде с образованием пеницилленовых кислот может быть представлена следующим образом:
Феноксиметилпенициллин определяют спектрофотометрическим методом при длине волны 268 нм, используя в качестве растворителя раствор гидрокарбоната натрия (4 мл 5%-ного раствора на 500 мл воды). Параллельно — в тех же условиях определяют ГСО феноксиметилпенициллина.
Для определения бензилпенициллина натриевой и калиевой соли, феноксиметилпенициллина, диклоксациллина натрия, ампициллина и его натриевой соли МФ также рекомендовано спектрофотометрическое определение. Оно основано на взаимодействии раствора препарата при нагревании на водяной бане с имидазолом и хлоридом ртути (II). Светопоглощение полученного раствора измеряют при 325 нм относительно смеси реактивов. Фотоколориметрические методы определения природных пенициллинов основаны на реакциях образования окрашенных гидроксаматов железа или меди.